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          1. NRPB58L Ni-TED琼脂糖凝胶FF

            发布日期:2021-10-27 阅读次数:2073

            品  名:Ni-TED琼脂糖凝胶FF

            英文名:Nickel Tris(carboxymethyl)ethylenediamine NUPharose Fast Flow, Ni-TED NUPharose FF

            目录号:NRPB58L .NRPB58S(预装柱)

            规  格:20 ml100 ml1L1 ml预装柱5 ml预装柱特殊规格订制

            运  输:2 ~ 30℃常压 .避光

            贮  存:20%乙醇2 ~ 25℃

            保质期:5.


            相关介绍: 

            Ni-TED琼脂糖凝胶FF以琼脂糖微球为基质通过活化偶联3羧甲基乙2胺(TED)再螯合Ni2+.与亚氨基2乙酸(IDA)相比Ni-TED琼脂糖凝胶FF具有很好的螯合剂 .还原剂 .碱性的耐受性如样品中含有10-100mM EDTA或10-100mM β-巯基乙醇或5-20mM DTT均可正常纯化;无需脱镍也可以用1M NaOH再生清洗.


            Ni-TED琼脂糖凝胶FF主要用于纯化带组氨酸标签(His-Tag)的重组蛋白.纯化原理是利用重组蛋白组氨酸标签的咪唑环可与过渡金属Ni2+形成稳定的配位键因4芴匾 .牢固 .可逆地吸附于固定这些金属离子的基质结合了His-Tag重组蛋白的Ni-TED琼脂糖凝胶FF1般通过增加咪唑浓度进行竞争洗脱.


            技术指标:

            基质

            6%琼脂糖凝胶

            配基

            -N(CH2COOH)CH2CH2N(CH2COOH)2

            配基密度

            30 μmol/ml

            填料粒径

            60~180 μm

            好的流速

            800 cm/h

            推荐流速

            50-100 cm/h

            pH稳定性

            pH 3-12(清洗pH 2-14

            0.3 MPa

            载量

            20 mg His-tag重组蛋白/ml 


            使用方法:

            1 .色谱柱装填

            (1)所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度1样液体好的做脱气处理.

            (2)于柱子下端加入蒸馏水以除去柱子中的空气关闭柱子出口于柱内保留少量的蒸馏水.

            (3)将琼脂糖凝胶连续倒入柱子时要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流以减少气泡的产生让填料先自然沉降.

            (4)柱压不超过0.3MPa如果装柱系统中无法测柱压则正常流速下填装.

            (5)填装好的Ni-TED琼脂糖凝胶FF柱用2-5个柱体积的初始缓冲溶液平衡建议流速100cm/h平衡后的柱子可以用于His-Tag重组蛋白的上样和洗脱纯化.

            2 .上样

            (1)缓冲液选择:1般选用pH6-8的结合缓冲液常用缓冲液有10-00mM 磷酸钠缓冲液 .20-200mM Tris-HCl缓冲液等.于缓冲液中1般要加入0.15-0.5M的NaCl以消除离子交换作用.于初次使用Ni-TED琼脂糖凝胶FF推荐使用50mM PBS(50 mM NaH2PO40.5M NaClNaOH调节pH 7.4)作为结合缓冲液.

            (2)样品处理:样品的缓冲液应与所选结合缓冲液1致.为保证缓冲液1致可以于结合缓冲液中破碎细菌 .或调解pH与结合缓冲液1致 .或交换至结合缓冲液(常用方法有透析 .超滤 .脱盐柱换液等) .或用结合缓冲液稀释2-10倍等.样品上柱前应0.45μm过滤.

            3 .洗脱

            (1)Ni-TED琼脂糖凝胶FF最常用的洗脱方法为增加咪唑浓度进行洗脱.

            (2)咪唑为碱性相应缓冲液配制后需要用HCl进行调节pH.

            (3)于初次使用Ni-TED琼脂糖凝胶FF不知道洗脱的咪唑浓度建议于结合缓冲液中分别加入10mM .20mM .50mM .100mM .200mM .500mM咪唑浓度从低到高分别洗脱和收集通过SDS-PAGE电泳等方法鉴定洗脱组份.

            (4)有条件的也可以进行线性咪唑梯度洗脱确定较佳洗脱条件.

            4 .于位清洗

            使用完的层析柱出现堵塞 .压力增大 .流速减慢 .载量下降等情况时就需要进行于位清洗.Ni-TED琼脂糖凝胶FF的优势为无需脱镍即可用1M NaOH再生清洗所以清洗最常用的方法:使用完的层析柱用蒸馏水清洗3-5个柱体积然后用1M NaOH清洗3-5个柱体积(保持时间0.5-1h)然后用蒸馏水清洗至中性即可.同其它层析介质1样为了达到更好的清洗目的可以采用反向清洗;如需去除热源可于1M NaOH中保持更长时间(1-2h).

            除了NaOH清洗外强电荷蛋白可以用1-2M NaCl进行清洗;脂类 .脂蛋白 .强疏水蛋白可以用30%异丙醇(或70%乙醇)进行清洗.

            导购指南

            中文名

            英文简称

            货号

            规格

            产品描述

            重力预装柱

            Ni-TED琼脂糖凝胶FF重力预装柱

            Ni-TED  NUPharose FF pre-packed column

            NRPB58S-Z11

            1*1mL

            1支*1ml

            NRPB58S-Z41

            4*1mL

            4支*1ml

            NRPB58S-Z15

            1*5mL

            1*5mL

            NRPB58S-Z25

            2*5mL

            2支*5mL

            AKTA中压预装柱

            Ni-TED琼脂糖凝胶FF中压预装柱

            Ni-TED  NUPharose FF pre-packed column

            NRPB58S-Y11

            1*1mL

            1支*1ml

            NRPB58S-Y41

            4*1mL

            4支*1ml

            NRPB58S-Y15

            1*5mL

            1*5mL

            NRPB58S-Y25

            2*5mL

            2支*5mL

            填料

            Ni-TED琼脂糖凝胶FF

            Ni-TED  NUPharose FF

            NRPB58L-10

            10mL

            1瓶*10ml

            NRPB58L-20

            20mL

            1瓶*20ml

            NRPB58L-100

            100mL

            1瓶*100ml

            NRPB58L-500

            500ml

            1瓶*500ml

            注:BOB电竞官网生物填料体积为实际琼脂糖凝胶体积



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