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        1. NRPB11L NHS-琼脂糖凝胶FF

          发布日期:2021-10-27 阅读次数:2762

          品  名:NHS-琼脂糖凝胶FF

          英文名:NHS Activated NUPharose Fast Flow, NHS NUPharose FF

          目录号:NRPB11L

          规  格:1ml10 ml100 ml1L特殊规格订制

          运  输:2 ~ 25℃常压 .避光

          贮  存:100%异丙醇-20℃

          保质期:1.


          相关介绍:

          NHS-琼脂糖凝胶FF是1种将琼脂糖凝胶微球用NHS活化形成的生物亲和层析分离介质.该产品保留了琼脂糖极好的亲水性及大网架结构与生物活性大分子有很好的相容性具有载量高非特异性吸附少流速快等特点.本活化的琼脂糖凝胶能温和的与氨基基团反应特别适合偶联抗体 .链霉亲和素 .酶 .核酸等功能性生物大分子.


          技术指标:

          外观

          乳白色半透明凝胶状凝胶

          基质

          4%琼脂糖凝胶

          配体

          NHS

          配体密度

          ≥15 μmol/mL

          蛋白质载量

          ≥10 mg/ml IgG

          耐反压

          0.3 MPa

          粒径范围

          60 ~ 180μm

          工作温度

          4 ~ 40℃

          基质pH稳定性

          3 ~ 12(长时间);2 ~ 14(短时间)

          基质化学稳定性

          于以下溶液中稳定:常用的水相缓冲液;1 mol/L NaOH1 mol/L乙酸(pH 4.0);6 mol/L盐酸胍;70%乙醇.


          应用实例:

          实验名称:NHS-琼脂糖凝胶FF偶联抗体.

          实验步骤:

          1. 配制抗体:取100 mg IgG加10 ml 偶联缓冲液(0.2 M NaHCO3, 0.5 M NaCl, pH 8.3)溶解留0.1 ml以便测定偶联效率.

          2. 偶联反应:取10 ml NHS-琼脂糖凝胶FF用50 ml 1 mM HCl分3次清洗去除保存液清洗后立即加入抗体偶联溶液中4℃震荡反应6 小时或者过夜进行偶联反应.

          3. 封闭:滤出反应液用50 ml偶联缓冲液清洗偶联后的凝胶然后用10 ml封闭缓冲液(0.2 M NaHCO3, 0.5 M NaCl, 0.5 M 乙醇胺, pH 8.3)室温震荡4 小时(或者过夜)封闭未偶联的基团封闭后用20 ml蒸馏水洗干净即可.

          4. 检测:偶联前后的反应液用SDS-PAGE检测对比偶联效率偶联好的填料根据配基特性测定功能和载量.


          注意事项:

          1. 如果配基的稳定性不了解可以选择不同pH的缓冲液和温度用配基相应浓度的溶液0.5 ~ 1 ml不加填料模拟偶联条件观察溶液是否会产生沉淀.有沉淀产生对应的偶联效果就不好可以稍微降低pH或温度同时可以加5%左右的甘油或PEG保护蛋白避免产生沉淀总之对于任何配基好的能了解其溶解性及稳定性避免实验失败导致损失.

          2. 如果偶联的配基不稳定可于摇床上4℃振摇偶联1 ~ 12小时以维持配基的活性.偶联配基后綸烨逑刺盍媳苊庥诟遬H 条件中配基失活.

          3. 更稳定的配基可以直接溶解于0.2 M碳酸氢钠可适当提高温度如室温偶联时间则相应可缩短至1 ~ 2 小时.

          4. 偶联蛋白的较适pH为7.5 ~ 9.0于室温或4℃均可提高温度能增加配基的偶联效率根据蛋白的稳定性选择合适的pH 和温度.偶联蛋白溶液的浓度以5 ~ 15 mg/ml较佳.凝胶体积和配基溶液的体积比以1:0.5 ~ 1:2.0较佳.

          5. 偶联的缓冲液可以是碳酸盐 .硼酸盐和磷酸盐缓冲液但好的不能使用氨基的缓冲体系如Tris-HCl缓冲液.

          6. 封闭的缓冲液1般使用带氨基的衊肿邮约寥缫掖及 .Tris等pH于8 ~ 9室温封闭数小时可完全封闭.推荐的封闭缓冲液为0.5 M 乙醇胺0.5 M NaClpH 8.3或0.1 M Tris-HClpH 8.5.

          7. 于偶联中尽量使用温和的混匀方式如震荡 .翻转 .旋转等.如使用磁力搅拌器或者机械搅拌需要降低搅拌的速度只要把填料能混匀完全悬浮起来即可避免剧烈搅拌使凝胶微球破碎.

          8. NHS-琼脂糖凝胶FF需现取现用避免时间过长造成活性降低.

           导购指南


          中文名

          英文简称

          货号

          规格

          产品描述

          NHS-琼脂糖凝胶FF

          NHS Activated NUPharose FF

          NRPB11L-10

          10mL

          1*10ml

          NRPB11L-20

          20mL

          1*20ml

          NRPB11L-100

          100mL

          1*100ml

          NRPB11L-500

          500ml

          1*500ml

          注:BOB电竞官网生物填料体积为实际琼脂糖凝胶体积


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